Ürün Açıklaması

M45 MICROGEN® LEGIONELLA

MICROGEN® LEGIONELLA, Legionellapneumophila ve seçici besiyerinden yaygın olarak izole edilen diğer Legionella türlerinin identifikasyondoğrulamasına yönelik aglütinasyon testidir.

Test L. pneumophila şüphesiolan hasta numuneleri ve çevresel kaynaklar için uygundur ve L. pneumophila serogrup 1 ve serogrup2-15* ve yaygın olarak izole edilen diğer Legionellatürlerinin ayrı ayrı identifikasyonunu mümkün kılar.

*Not: Klinik Mikrobiyoloji klavuzunda henüz belirtilen L. pneumophila serogrup 16, serogrup 6ile çapraz tepki gösterdiğinden teorik olarak Microgen serogrup 2-15 latexreaktifi L. pneumophila serogrup 16izolatları ile aglütinasyon oluşturacaktır.

ÇALIŞMA PRENSİBİ

Test Reagent 1 (M45a); içerisindeki latex parçaları L. pneumophila serogrup 1’e karşı oluşan polyclonal tavşan antibodyleriile kaplanmıştır. Test Reagent 2-15 (M45b); içerisindeki latex parçaları L. pneumophila serogrup 2-15’e karşıoluşan polyclonal tavşan antibodyleri ile kaplanmıştır. Test Reagent Species(M45d) ; içerisindeki latex parçaları 10 yaygın Legionella türlerine karşı oluşan polyclonal tavşan antibodyleri ilekaplanmıştır.  Bu latex parçaları uygun Legionella bakterileri içerensüspansiyon veya ilgili Legionellabakterilerinin inaktif antijenleri ile karıştırıldığında aglütinasyon sonucugözle görünür çökelti oluşur.

KİT İÇERİĞİ

KİT İÇERİĞİNE İLAVE EDİLECEKLER

Bakteriyal öze

Legionella seçicibesiyeri

Camkaynatma tüpleri

%0.85 İzotonik tuz çözeltisi

ÖRNEK HAZIRLAMA

ÖncedenLegionella seçici besiyerindebüyütülmüş tek kolonileri seçiniz.

Kolonilerin Legionella morfolojisi gösterdiğinden emin olunuz.

PROSEDÜR

REAKTİF KONTROL

Microgen Legionella Latex reaktiflerini ( M45a, b ve d) (Kitiçerisinde mevcut)  nazikçe karıştırarak slide üzerinde ayrı kuyulara her reaktiftenayrı ayrı 1’er damla damlatınız.

Ayrıkuyulardaki farklı reaktiflerin üzerine 1’er damla tuz çözeltisi (M40) (saline)ilave ediniz.

Karıştırma çubuğu yardımıyla reaktif ve tuz çözeltisini karıştırarakkuyu içerisine yayınız.

Slide’ıhafifçe sallayıp, 2 dakika bekletiniz. 2 dakika sonunda aglütinasyon gözlenirise en azından bir reaktif kontamine olmuş demektir ve yeni kit kullanılmalıdır.

POZİTİF KONTROL

Test slideüzerinde tek bir kuyuya Positive Control( M45c) (Kit içerisinde mevcut)  damlatınız.

Microgen Test Reagent 1’i ( M45a) (Kit içerisinde mevcut)   nazikçe karıştırarak aynı kuyuya 1 damladamlatınız. Damlalığı slide üzerinedeğdirmeyiniz.

Karıştırmaçubuğu ile karıştırınız. Slide’ı hafifçe sallayıp, 2 dakika bekletiniz. 2dakika içinde aglütinasyon gözlenir.

Aynıprosedürü Test Reagent 2-15 (M45b)ve Test Reagent Species ( M45d) içintekrarlayınız. Aglütinasyon gözlenmeli, eğer üç reaktiften herhangi birindeaglütinasyon gözlenmiyorsa yeni kit kullanılmalıdır.

TEST PROSEDÜRÜ

1.      İzotonik tuz çözeltisinden (M40) (Kit içerisinde mevcut)   aglütinasyon slide (Kit içerisinde mevcut)  üzerindeki her üç kuyuya1’er damla damlatınız.

2.      Steril öze ile seçici agardan Legionella kolonilerinin 3-4 tanesiseçilerek tuz çözeltisi ile emülsiyonyapınız. Karıştırma çubuğu yardımıyla kuyu içerisinde örneği yayınız.

3.      Ağır vedüz bir emülsiyon oluşturunuz. Eğer doğru emülsiyon oluştuysa ADIM 7’ye geçiniz.

4.      Eğeroluşturduğunuz emülsiyon “ipliksi” veya “taneli” görünüme sahip ise ( geneldeeski kültür kullanımında görülür), aşağıdaki adımları takip ediniz.

5.      0.5 mL%0.85’lik tuz çözeltisini cam kaynatma tüpüne koyunuz. Seçici besiyerindenalınan koloniler ile bulanık ve homajen bir süspansiyon oluşturunuz.

6.      Süspansiyon tüplerini 5 dkkaynatıp, oda sıcaklığında soğutunuz. Slide üzerinde üç kuyudan herbirine 30 µlkaynamış süspansiyondan ilave ediniz.

7.      Latex Test Reaktiflerini (M45a, b ved) nazikçe karıştırarak homojen hale getiriniz.

8.      Slide üzerindeki bakteriyalsüspansiyonlardan birine Test Reagent 1’den(M45a)1 damla, bir diğer süspansiyona TestReagent 2-15’den(M45b) 1 damla, üçüncü süspansiyona Test Reagent Species’den (M45d) 1 damladamlatınız.   Damlalığıslide üzerine değdirmeyiniz.

9.       Her biri için ayrı ayrı karıştırma çubuğu kullanarakreaktifleri süspansiyon içerisinde karıştırıp, kuyu içerisine yayınız.

10.  Slide’ı hafifçe sallayıp, 2 dakikabekletiniz. 2 dakika sonunda aglütinasyon sonuçlarını gözleyiniz.

11.  Okuma sonrasında kullanılan tümlatex slidelar ve karıştırma çubuklarını atınız.

YORUM

Aglütinasyongözlenen pozitif test örnekleri için kullanılanreaktife göre L. pneumophilaserogrup 1 veya L. pneumophilaserogrup 2-15 veya diğer yaygın Legionellatürleri bulunduğu söylenir.

Aglütinasyongözlenmeyen test örnekleri için Legionellatürlerinin bulunmadığı söylenir.

YAYGIN OLARAK İZOLE EDİLEN LEGIONELLA TÜRLERİ